A DNA Releasy használata

A DNAreleasy-vel egy összesen kevesebb, mint 10 perces inkubálási procedúra után szinte bármilyen biológiai mintából közvetlenül, DNS tisztítás nélkül lehet DNS-t amplifikálni. A legtöbb esetben a termék kiváltja a DNS tisztítással járó munkát és csökkenti költségét.

A DNA Releasy használata:

1. Keverje el a sejteket 20 µl DNAreleasy-ben. Fontos, hogy a folyadék teljesen ellepje a sejteket!

2. Amennyiben szükséges ( fűtött tető nélküli thermal cyclereknél) rétegezzen ásványolajat az elegy tetejére

3. Tegye bele a készülékbe

4. Lízis 3 lépésben :

- inkubálás 75°C-on 5 percig

- inkubálás 96°C-on 2 percig

A lízis után a teljes DNAreleasy lizátum, vagy annak egy része azonnal felhasználható PCR-hez, vagy a felhasználásig -20°C-on tárolható. A DNAreleasy a PCR mix legfeljebb 40%-át alkothatja.

Megjegyzés: a lízátum DNS tartalmának pontos meghatározása nem végezhető el egyszerűen, spektrofotométerrel nem mérhető közvetlenül.

A releasyhez a Kapa Robust HS polimerázt javasoljuk.

Változat nehezen feltárható sejtekhez

Amennyiben nagyon ellenálló sejteket kell lizálnia, javasoljuk a következő protokol változatot:

1. Keverje össze a sejteket 20 µl DNAreleasy-vel. Használjon kevés mintát, és győződjön meg, hogy a reagens teljesen ellepi.

2. Amennyiben szükséges (fűtött tető nélküli thermal cyclereknél) rétegezzen ásványolajat az elegy tetejére

Tegye bele a készülékbe

Lizálás :

első lépés: 65°C 15 perc (ha szükséges, lehet hosszabb is)
második lépés: 96°C 2 perc
harmadik lépés: 65°C 4 perc
negyedik lépés: 96°C 1 perc
ötödik lépés: 65°C 1 perc
hatodik lépés: 96°C 30mp
hetedik lépés: 20°C-on tartani

A lízis után a teljes DNAreleasy lizátum, vagy annak egy része azonnal felhasználható PCR-hez, vagy a felhasználásig -20°C-on tárolandó. A DNAreleasy a PCR mix legfeljebb 40%-át alkothatja.