KAPA Biosystems

A KAPA Biosystems irányított molekuláris evolúcióval fejlesztett PCR és real-time PCR enzimek, új generációs szekvenáló reagnesek gyártója. A KAPA kitekben dolgozó enzimek olyan, irányított molekuláris evolúcióval tökéletesített enzimfehérjék, melyek az elmúlt években elterjedt vad típusú enzimekre (Taq pol, Pfu pol.) épülő kitekhez képest jelentős teljesítménytöbbletet nyújtanak.

Irányított molekuláris evolúció

A KAPA high-throuput molekuláris evolúciós platformja a természetes szelekciót emulálja a laborban, amivel új szerkezetű fehérjéket és új funkcionalitású enzimeket hoztak létre.

A legelterjedtebb PCR enzimet, a vad Taq-polimerázt használva kiindulópontként véletlen pontmutációkkal variánsok millióit hozták létre, melyek mind más-más polimerázt kódoltak. A génkönyvtárat coli-ba transzformálva minden E. coli sejt más-más módosított taq polimeráz enzimet expresszált. A sejtszuszpenziót víz-olaj emulzióba vitték, úgy, hogy egy cseppbe statisztikusan egy E. coli sejt kerüljön, a szelekciós nyomás (pl . gátlószerek, SYBR Green) és a PCR reakcióhoz szükséges komponensek társaságában. A sejteket hővel feltárva mindegyik csepp egy kis mikro bioreaktorrá vált, amelyben sikeres mutáció esetén az új Taq polimeráz saját DNS-ét amplifikálta fel.

Az irányított evolúció eredményeként megnövelt teljesítményű polimeráz enzimek sorozatát hozták létre, hagyományos végpont PCR-hez, real-time PCR-hez és új generációs szekvenáló alkalmazásokra, melyek több tulajdonságban felülmúlják az eddig használt vad típusú/racionális tervezésű enzimeket.

közül szabadalmaztatott szelekciós több millió klón közül

Ilyen például az extrém gyors, 1 s/kb sebességgel szintetizáló KAPA 2G Fast Taq, KAPA SYBR Fast, melynek a SYBR Green nem gátlószere, vagy magas AT, magas GC tartalmú templátokon is kiegyensúlyozott, nagy reakcióhatékonyságú, nagy szöveghűségű KAPA Hifi .

A KAPA Hifi rövidebb-hosszabb alacsonyabb-magasabb GC tartalmú templát DNS-eken nyújtott közel azonos reakció hatékonysága, elfogódottság mentessége triviális választássá tette a KAPA Biosystems NGS könyvtárkészítő kitjeiben, ahol egy fragment korai alulreprezentáltsága drámaian ronthatja a szekvenálás fedettségét.